- 聯系人 :
- 地址 : 武漢市東湖高新區高新大道666號光谷生物城B8棟
- 郵編 : 430075
- 所在區域 : 湖北
- 電話 : 134****3546 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : xpfu@163.com
?
服務簡介
RACE是基于PCR技術由已知的部分cDNA順序來獲得完整cDNA5′和3′端的方法。分離和克隆基因是研究基因結構、功能以及表達的基礎，通過建立和篩選cDNA文庫來分離克隆目的基因的經典方法繁瑣而且工作量大，而RACE則可以簡單而有效的從低豐度轉錄本中快速擴增cDNA末端，從而獲得目的基因全長cDNA序列。Invitrogen采用GeneRacer 試劑盒確保只有5’具有帽子結構，3’具有polyA全長cDNA才能擴增。
RACE原理
要獲得cDNA3′末端, 以OligodT錨定引物為引物反轉錄總RNA得到cDNA，接著用SP5和PCR錨定引物進行PCR循環即可擴增得到cDNA鏈。擴增的特異性取決于SP5的堿基與目的cDNA分子互補。要獲得cDNA5′末端，利用基因特異性引物SP1反轉錄總RNA, 分離反轉錄產物,用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)加上poly(A)尾。以d(T)錨定引物和位于延伸引物序列上游的基因特異性擴增引物SP2進行PCR擴增。再用PCR錨定引物和特異性巢式引物SP3進行第二輪PCR擴增。將PCR產物克隆進質粒載體，進行測序。最后,從兩個有相互重疊序列的3′和5′RACE產物來獲得全長cDNA,或者通過分析RACE產物的3′和5′末端順序,合成相應引物進行PCR擴增mRNA反轉錄產物來獲得。
服務流程
1、總RNA提取
2、已知序列驗證：依據客戶提供的序列設計引物擴增，驗證參考序列的存在及方向
3、5’和3’RACE
4、對獲取的序列進行測序驗證
客戶提供
材料要求新鮮、RNA不能降解，總RNA樣品不少于10μg
服務結果
1、構建好5’和3’RACE的TA克隆
2、產物SDS-PAGE圖譜，產物測序結果
3、詳細實驗流程及反應條件
服務質量
獲取的5’和3’RACE序列與已知序列連續存在于同一條cDNA片段上。