黑腹果蠅轉(zhuǎn)基因（P因子隨機(jī)插入轉(zhuǎn)基因 和attP-PhiC31整合酶定點(diǎn)插入 ）
產(chǎn)品名稱(chēng)： 黑腹果蠅轉(zhuǎn)基因（P因子隨機(jī)插入轉(zhuǎn)基因 和attP-PhiC31整合酶定點(diǎn)插入 ）
英文名稱(chēng)： piggybac and attP-PhiC31
產(chǎn)品編號(hào)： ID
產(chǎn)品價(jià)格： 詢(xún)價(jià)
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： 2025-08-15T14:00:29
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 樊女士
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P因子隨機(jī)插入轉(zhuǎn)基因
P因子是在果蠅基因組上發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)轉(zhuǎn)座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）兩種類(lèi)型。自主P因子自身能夠編碼轉(zhuǎn)座酶（transposase），介導(dǎo)P因子的轉(zhuǎn)座；非自主P因子則依賴(lài)外源的轉(zhuǎn)座酶來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)座。野生型的自主P因子長(zhǎng)2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重復(fù)序列，中間編碼含4個(gè)ORF的轉(zhuǎn)座酶基因，重復(fù)序列和轉(zhuǎn)座酶是發(fā)生轉(zhuǎn)座必不可少的元件。
表達(dá)轉(zhuǎn)座酶。我們可以根據(jù)客戶(hù)的選擇，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
| 轉(zhuǎn)座酶隨機(jī)插入 | ||
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 內(nèi)容 | 周期(周) |
| 注射樣品制備 | 1.Donor載體構(gòu)建：無(wú)縫克隆連接 載體：包含piggybac轉(zhuǎn)座子 + miniWhite marker 片段：包括質(zhì)粒亞克隆，基因組DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor質(zhì)粒去內(nèi)毒素提取 |
1~4 |
| 顯微注射 | 1.注射品系：w1118(或客戶(hù)指定品系) 2.注射樣品：donor質(zhì)粒 + piggbac轉(zhuǎn)座酶helper質(zhì)粒 3.注射胚胎數(shù)量：500-600個(gè) |
2 |
| 雜交和篩選 | 1.P0果蠅與平衡子雜交 2.篩選F1陽(yáng)性果蠅(紅眼) |
2 |
| 分子鑒定 | 1.插入目的序列鑒定 2.插入基因組位置鑒定 |
0 |
| 構(gòu)建穩(wěn)定品系 | 1.F1陽(yáng)性果蠅雜交雙染色體平衡子，確定插入染色體 2.構(gòu)建穩(wěn)定/純合品系 |
6~10 |
| 合計(jì) | 11~18 |
多樣化的attP果蠅品系：芳景提供多種有效的attP果蠅品系，涵蓋X染色體和2號(hào)、3號(hào)染色體上的多個(gè)位點(diǎn)，便于進(jìn)行基因重組。
?推薦常用attP品系：attP40(II,25C6)，attP2(III,68A4)，效率高并且經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，被證明不影響插入位點(diǎn)附近的基因功能，且插入序列表型穩(wěn)定。
?推薦重組用attP品系：attP5(II,50F1)，VK00005(III,75A10)，適用于分別同attP40和attP2的定點(diǎn)插入品系進(jìn)行重組構(gòu)建，從而進(jìn)行更復(fù)雜的課題研究。
廣泛的科研應(yīng)用場(chǎng)景：?外源序列轉(zhuǎn)入：可實(shí)現(xiàn)從簡(jiǎn)單到復(fù)雜序列的轉(zhuǎn)入，一般推薦載體總長(zhǎng)度小于15kb。
?內(nèi)、外源基因過(guò)表達(dá)：提供5~20×UAS，實(shí)現(xiàn)不同程度的基因過(guò)表達(dá)；提供多種泛表達(dá)和組織特異性表達(dá)的GAL4品系。
?RNA干擾：?jiǎn)蝹€(gè)shRNA針對(duì)單基因干擾研究多個(gè)shRNA串聯(lián)，對(duì)多個(gè)基因進(jìn)行共同干擾研究
?基因調(diào)控研究定制化服務(wù)：除了GAL4-UAS系統(tǒng)，芳景生物也擁有其他多種基因調(diào)控研究的經(jīng)驗(yàn)和方案可供選擇，如：
- 生殖系統(tǒng)表達(dá)：UASp-K10；
- 二元調(diào)控系統(tǒng)備選方案：lexA-lexAop，QF-QUAS-QS；
- 誘導(dǎo)啟動(dòng)或抑制表達(dá)：GeneSwitch，GAL80；
- Split-GAL4：p65AD，GAL4DBD；
- 增強(qiáng)子表達(dá)模式研究：GMR-FlyLight，VT系列等。
如果客戶(hù)希望將目的片段整合到特定的attP品系，可以將果蠅寄給我們進(jìn)行擴(kuò)增然后進(jìn)行注射。另外，我們免費(fèi)提供balancer雜交及鑒定服務(wù)（我們有FM7a，Bc/Cyo，TM3/TM6b等balancer品系），如果客戶(hù)需要與指定的品系進(jìn)行雜交，可提前將果蠅寄給我們進(jìn)行擴(kuò)增。
| attP-PhiC31定點(diǎn)插入 | ||
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 內(nèi)容 | 周期(周) |
| 注射樣品制備 | 1.Donor載體構(gòu)建：無(wú)縫克隆連接 載體：包含attB位點(diǎn) + miniWhite marker 片段：包括質(zhì)粒亞克隆，基因組DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor質(zhì)粒去內(nèi)毒素提取 |
1~4 |
| 顯微注射 | 1.注射品系：attP果蠅品系(PhiC31內(nèi)源表達(dá)) 2號(hào)染色體：attP40、attP5 3號(hào)染色體：attP2、VK00005 2.注射樣品：donor質(zhì)粒 3.注射胚胎數(shù)量：200-300個(gè) |
2 |
| 雜交和篩選 | 1.P0果蠅與平衡子雜交 2.篩選F1陽(yáng)性果蠅(紅眼) |
2 |
| 分子鑒定 | 1.插入目的序列鑒定 2.插入基因組位置鑒定【1】 |
0 |
| 構(gòu)建穩(wěn)定品系 | 1.F1陽(yáng)性果蠅雜交平衡子 2.構(gòu)建穩(wěn)定/純合品系 |
4~6 |
| 合計(jì) | 9~14 |