甲基化分析
產品名稱： 甲基化分析
英文名稱： Methylation analysis
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DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化學性修飾堿基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位點，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區域，在哺乳動物中mC約占C總量的2－7％。一般說來，DNA的甲基化會抑制基因的表達。DNA的甲基化對維持染色體的結構、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發生發展都起重要的作用。
我們利用重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而在適當的實驗條件下甲基化的胞嘧啶保持不變，再進行PCR擴增，甲基化的位點可以被當作一個C/T的SNP來處理；可利用直接測序法來判斷是否CpG位點發生甲基化。
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實驗原理
????DNA甲基化存在于大多數真核生物中，一般發生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區，起調控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%處于基因調控區的CpG島中。BSP甲基化測序（Bisulfite?Genomic?Sequencing?PCR）的原理通過對基因組DNA進行重亞硫酸鹽處理，非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉變成尿嘧啶，在隨后的PCR反應中尿嘧啶轉變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基，在反應完成時被保留，我們將擴增得到的PCR產物進行TA克隆測序，就可以分析甲基化發生的具體情況。該方法實驗結果準確性高，是甲基化檢測的金標準。
實驗流程
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