掃描電鏡/透射電鏡/免疫熒光/激光共聚焦/高內(nèi)涵活細(xì)胞成像
產(chǎn)品名稱： 掃描電鏡/透射電鏡/免疫熒光/激光共聚焦/高內(nèi)涵活細(xì)胞成像
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產(chǎn)品編號：
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產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時間： 2023-11-16T15:05:01
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掃描電鏡/透射電鏡/激光共聚焦
掃描電鏡
掃描電鏡取材要求：
由于電鏡電子束穿透能力的限制，必須把標(biāo)本切成厚度小于0.1um以下的薄片才適用，這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射電鏡的樣品制備方法中，超薄切片技術(shù)是最基本、最常用的制備技術(shù)。超薄切片的制作過程基本上和石蠟切片相似，需要經(jīng)過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
小提示：
透射電鏡標(biāo)本先應(yīng)用超薄切片機(jī)（Ultrotome）進(jìn)行切片，再經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。
掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級脫水，CO2臨界點干燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。
透射電鏡
透射電子顯微鏡在材料科學(xué)、生物學(xué)上應(yīng)用較多。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，樣品的密度、厚度等都會影響到最后的成像質(zhì)量，必須制備更薄的超薄切片，通常為50～100nm。所以用透射電子顯微鏡觀察時的樣品需要處理得很薄。
常用的方法：超薄切片法、冷凍超薄切片法、冷凍蝕刻法、冷凍斷裂法等。對于液體樣品，通常是掛預(yù)處理過的銅網(wǎng)上進(jìn)行觀察。
樣本制備方法：
由于電鏡電子束穿透能力的限制，必須把標(biāo)本切成厚度小于0.1um以下的薄片才適用，這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
??? 在透射電鏡的樣品制備方法中，超薄切片技術(shù)是最基本、最常用的制備技術(shù)。超薄切片的制作過程基本上和石蠟切片相似，需要經(jīng)過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
取材的基本要求
組織從生物活體取下以后，如果不立即進(jìn)行適當(dāng)處理，會由于細(xì)胞內(nèi)部各種酶的作用，出現(xiàn)細(xì)胞自溶現(xiàn)象。此外，還可能由于污染，微生物在組織內(nèi)繁殖使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)遭受破壞。因此，為了使細(xì)胞結(jié)構(gòu)盡可能保持生前狀態(tài)，必須做到快、小、準(zhǔn)、冷：
(1)．動作迅速，組織從活體取下后應(yīng)在最短時間內(nèi)(爭取在1分鐘內(nèi)) 投入2.5%戊二醛固定液。
(2)．所取組織的體積要小，一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因為固定劑的滲透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內(nèi)部將不能得到良好的固定。
(3)．機(jī)械損傷要小，解剖器械應(yīng)鋒利，操作宜輕，避免牽拉、挫傷與擠壓。
(4)．操作最好在低溫(0℃～4℃)下進(jìn)行，以降低酶的活性，防止細(xì)胞自溶。
(5)．取材部位要準(zhǔn)確。
取材方法：將取出的組織放在潔凈的蠟版上，滴一滴預(yù)冷的固定液，用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下并修小，然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液，應(yīng)先用固定液洗幾遍，然后再切成小塊固定。
免疫熒光染色
主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結(jié)合，其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識別并結(jié)合一抗，在激光共聚焦系統(tǒng)下即可觀察到熒光。染色程序分為兩步，第一步，用已知未標(biāo)記的抗體（Anti LC3II）加到未知抗原樣本上；第二步，加上熒光標(biāo)記的抗球蛋白抗體或抗IgG、IgM抗體（Anti Alexa Fluor 647）。如果第一步發(fā)生了抗原抗體反應(yīng)，熒光標(biāo)記的抗球蛋白抗體就會和已結(jié)合抗原的抗體進(jìn)一步結(jié)合，從而可鑒定抗原。
我公司可以提供單標(biāo)、雙標(biāo)及三標(biāo)的免疫熒光服務(wù)。
激光共聚焦
激光共聚焦掃描顯微鏡（laser confocal scanning microscope）用激光作掃描光源，逐點、逐行、逐面快速掃描成像，掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡，物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點，也是瞬時成像的物點。由于激光束的波長較短，光束很細(xì)，所以共焦激光掃描顯微鏡有較高的分辨力，大約是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。系統(tǒng)經(jīng)一次調(diào)焦，掃描限制在樣品的一個平面內(nèi)。調(diào)焦深度不一樣時，就可以獲得樣品不同深度層次的圖像，這些圖像信息都儲于計算機(jī)內(nèi)，通過計算機(jī)分析和模擬，就能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。
激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)，也可以用于細(xì)胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計以及細(xì)胞形態(tài)的測量。
高內(nèi)涵活細(xì)胞成像
高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析系統(tǒng)由三個部分組成：全自動高速顯微成像，全自動圖像分析和數(shù)據(jù)管理。全自動高速顯微成像在短時間內(nèi)生成大量的圖像，全自動圖像分析從這些圖像中提取大量的數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)管理軟件負(fù)責(zé)建檔存儲、注釋比較、檢索分享這些圖像和數(shù)據(jù)。
高內(nèi)涵技術(shù)最初應(yīng)用于藥物篩選，隨著技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，近年來在生命科學(xué)研究中得到了廣泛的應(yīng)用，包括細(xì)胞信號通路，腫瘤學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)，免疫學(xué)，傳染病學(xué)，干細(xì)胞的研究等等。HCA提供的信息不可能從傳統(tǒng)方法中獲得，很多實驗用高內(nèi)涵平臺來完成，比現(xiàn)有的方法更靈敏，通量更高，成本更低，結(jié)果更準(zhǔn)確和可靠。
其中高內(nèi)涵篩選(HCS)是一套自動化分析方法，利用整合的顯微鏡、圖像處理技術(shù)及可視化工具從細(xì)胞或細(xì)胞群中提取數(shù)據(jù)，獲得定量分析結(jié)果。HCS一般應(yīng)用于高通量的樣品熒光成像，提供定量分析結(jié)果。此外，HCS能夠結(jié)合單個細(xì)胞的多重檢測結(jié)果，同時分析單次實驗中的多個細(xì)胞亞群。
高內(nèi)涵篩選的技術(shù)優(yōu)勢：
- 高內(nèi)涵篩選可在保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能完整性;
- 同時檢測被篩樣品對細(xì)胞形態(tài)、生長、分化、遷移、凋亡、代謝途徑及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等各個環(huán)節(jié)的影響;
- 在單一實驗中獲取大量相關(guān)信息，確定其生物活性和潛在毒性。
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