端粒酶活性檢測
產品名稱: 端粒酶活性檢測
英文名稱: duanlimeihuoxing
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產品價格: 1600
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1、研究背景理論:
端粒酶(Telomerase),在細胞中負責端粒的延長的一種酶,是基本的核蛋白逆轉錄酶,由RNA模板和催化蛋白組成。可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端,把DNA復制損失的端粒填補起來,使端粒修復延長,可以讓端粒不會因細胞分裂而有所損耗,使得細胞分裂的次數增加。
端粒有重要的生物學功能,可穩定染色體的功能,防止染色體DNA降解、末端融合,保護染色體結構基因DNA,調節正常細胞生長。
端粒在不同物種細胞中對于保持染色體穩定性和細胞活性有重要作用,端粒酶能延長縮短的端粒(縮短的端粒其細胞復制能力受限),從而增強體外細胞的增殖能力。
端粒酶在保持端粒的結構穩定、基因組完整性、保持細胞長期的分裂活性和潛在的繼續增殖能力等方面有重要作用。端粒酶在正常人體組織中的活性被抑制,在腫瘤中被重新激活,從而可能參與惡性轉化。
細胞內端粒酶的多少可預測端粒的長短。正常人體細胞中檢測不到端粒酶。一些良性病變細胞,體外培養的成纖維細胞中也測不到端粒酶活性。但在生殖細胞睪丸、卵巢、胎盤及胎兒細胞中此酶為陽性。
令人注目的發現是,惡性腫瘤細胞具有高活性的端粒酶,端粒酶陽性的腫瘤有卵巢癌、淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、結腸癌、肺癌等等。人類腫瘤中廣泛地存在著較高的端粒酶活性。這樣一來,我們又發現了一種腫瘤細胞的特異物質。
端粒(telomere)是真核細胞生物染色體末端的特殊DNA-蛋白結構,含有多個重復序列,人類為由6個堿基重復序列(TTAGGG)和結合蛋白組成,。
有證據表明,由于正常細胞線性DNA復制時5'末端消失,隨著體細胞不斷增殖,端粒DNA長度逐漸縮短,與細胞壽命密切相關,而端粒的合成又依賴于端粒酶(Telomerase)的活性。
故有人稱端粒為正常細胞的“分裂鐘”(Mistosis clock),端粒長短和穩定性決定了細胞壽命,并與細胞衰老和癌變密切相關。
研究發現,在絕大多數的惡性腫瘤組織及腫瘤細胞株中有高活性的端粒酶表達,而正常體細胞則不能檢測出端粒酶活性。因此,對組織或細胞的端粒酶活性檢測具有重要的意義。
端粒酶的活性在真核細胞中可檢測到,其功能是合成染色體末端的端粒,使因每次細胞分裂而逐漸縮短的端粒長度得以補償,進而穩定端粒長度。主要特征是用它自身攜帶的RNA作模板,以dNTP為原料,通過逆轉錄催化合成后延長鏈5‘端DNA片段或外加重復單位。
端粒酶在細胞中的主要生物學功能,是通過其逆轉錄酶活性復制和延長端粒DNA來穩定染色體端粒DNA的長度。
近年有關端粒酶與腫瘤關系的研究進展表明,在腫瘤細胞中端粒酶還參與了對腫瘤細胞的凋亡和基因組穩定的調控過程。與端粒酶的多重生物學活性相對應,腫瘤細胞中也存在復雜的端粒酶調控網絡。通過蛋白質-蛋白質相互作用在翻譯后水平對端粒酶活性及功能進行調控,則是研究端粒酶調控機制的熱點之一。
2、端粒酶的活性檢測:
傳統檢測端粒酶活性方法需要大量組織,需要大量放射或制膠時間,實驗過程繁瑣,且檢測周期長。
TRAP法作為端粒酶活性檢測的金標準,然而在結果節度使,以銀染法PAGE膠撿測端粒酶為例:因通過條帶的明細程度判讀,存在結果主觀判讀,且重復性較差的不足。
本公司提供的端粒酶活性檢測方案,是以TRAP法+毛細管電泳技術為基礎,以HELA細胞作為陽性標準品,可以直觀、準確地檢出組織或細胞樣本的TTAGGG六堿基的重復次數和TRAP擴增的序列長度。
樣本要求:1×106的活性狀態細胞
檢測周期:收到樣本5-7個工作日
檢測結果圖譜:





