核體系酵母文庫構(gòu)建/均一化cDNA文庫構(gòu)建/全長cDNA文庫構(gòu)建/Fosmid文庫構(gòu)建
產(chǎn)品名稱： 核體系酵母文庫構(gòu)建/均一化cDNA文庫構(gòu)建/全長cDNA文庫構(gòu)建/Fosmid文庫構(gòu)建
英文名稱： Western Biotechnology Inc
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產(chǎn)品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
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更新時間： 2023-11-16T15:09:24
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核體系酵母文庫構(gòu)建/均一化cDNA文庫構(gòu)建/全長cDNA文庫構(gòu)建/Fosmid文庫構(gòu)建
核體系酵母文庫構(gòu)建
酵母雙雜交（Yeast two hybrid）技術(shù)是利用酵母遺傳學(xué)方法分析蛋白質(zhì)之間的相互作用，已被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能基因組學(xué)等領(lǐng)域，已成為分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的重要實(shí)驗(yàn)手段。經(jīng)過不斷的完善和發(fā)展，不但可以檢測已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，更重要的是還可發(fā)現(xiàn)與已知蛋白相互作用的未知蛋白。
推出兩套酵母雙雜交文庫構(gòu)建體系：
一是SMART體系，在現(xiàn)有酵母雙雜交文庫構(gòu)建流程（BD MatchmakerTM library）基礎(chǔ)之上加入獨(dú)特步驟，使文庫中高豐度表達(dá)基因明顯降低，從而使文庫豐度均一提高篩選陽性率；
二是Gateway體系，采用Gateway位點(diǎn)特異性重組技術(shù)（Cloneminer cDNA library construction kit）構(gòu)建文庫。
應(yīng)用領(lǐng)域：
檢測細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生互作的蛋白質(zhì)，基于轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄激活域AD與DNA結(jié)合域BD分別構(gòu)建融合基因 ，通過激活報告基因表達(dá)，探測蛋白互作。
部分物種：人、小鼠、大鼠、對蝦、水稻、擬南芥、牡丹、稻飛虱、蘋果、油菜、小麥、煙草、銀杏、土豆、西瓜、棉花。
均一化cDNA文庫構(gòu)建
均一化cDNA文庫是克服基因轉(zhuǎn)錄水平上巨大差異給文庫的篩選和分析帶來障礙的有效措施，有利于研究基因的表達(dá)和分析。現(xiàn)在，在構(gòu)建均一化cDNA文庫中至少有兩種主要的觀點(diǎn)。一種是基于復(fù)性動力學(xué)的原理，高豐度的cDNA在退火下復(fù)性速度快，而低豐度的cDNA復(fù)性要很長時間，從而可以通過控制復(fù)性時間來降低豐度；另一種是基于基因組DNA在拷貝數(shù)上具有相對均一化的性質(zhì)，通過cDNA和DNA的飽和雜交而降低在文庫中高拷貝存在的cDNA的豐度。我們主要通過第一種方法實(shí)現(xiàn)均一化，以達(dá)到降低基因間拷貝數(shù)差異，有助于低拷貝基因的篩選。
操作流程
- RNA提取
- mRNA分離
- cDNA合成與均一化處理
- cDNA長度分級
- 分級后的cDNA與目的載體的all-direct重組
- 重組產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化
均一化cDNA文庫的鑒定
檢測庫容量（總CFU）；隨機(jī)挑取32個克隆子，PCR方法檢測平均插入片段大小；抽提均一化cDNA文庫的混合質(zhì)粒（大抽），qPCR檢測均一化前后兩個文庫總質(zhì)粒中兩個看家基因的表達(dá)量差異，以判斷均一化的效果。
送樣要求
針對每個文庫，客戶需提供200ug以上的RNA或2g以上的組織樣本。
結(jié)果提供
我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告。
全長cDNA文庫構(gòu)建
我們提供高全長比例的文庫構(gòu)建服務(wù)，全長比例可以高達(dá)85%以上。
普通全長cDNA文庫構(gòu)建
操作流程
- 客戶樣品QC，Total?RNA的提取。
- mRNA的分離。
- 采用CAP Trapper法進(jìn)行全長mRNA的富集。
- 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。
- 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。
- 將分級純化的cDNA與載體進(jìn)行all-direct重組反應(yīng)。
- 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。
- cDNA文庫的QC。檢測文庫庫容量；每個文庫隨機(jī)挑取32個克隆子，PCR檢測檢測平均插入片段大小，陽性率； 隨機(jī)挑取24個克隆進(jìn)行正向測序，通過NCBI的BLSTAX分析全長率。
送樣要求
針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。
結(jié)果提供
我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜，24個克隆正向測序報告，文庫構(gòu)建報告。
Fosmid文庫構(gòu)建
提供高質(zhì)量，高庫容量的Fosmid文庫構(gòu)建服務(wù)
操作流程
結(jié)果提供
我們提供構(gòu)建好的fosmid文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機(jī)克隆子的質(zhì)粒酶切鑒定電泳圖，文庫構(gòu)建報告。
威斯騰實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程
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威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目