熒光定量PCR
產品名稱： 熒光定量PCR
英文名稱： Western Biotechnology Inc
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更新時間： 2024-10-31T11:50:38
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熒光定量PCR
熒光定量PCR起源： 熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（PerkinElmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針來實現(xiàn)其定量功能的，與變通PCR相比，F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點。與普通PCR相比，F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點：1、封閉反應，無需PCR后處理。2、特異性強，靈敏度高。3、采用對數(shù)期分析，摒棄終點數(shù)據(jù)，定量準確。4、定量范圍寬，可達到10個數(shù)量級。5、儀器在線式實時檢測，結果直觀，避免人為判斷。6、可實現(xiàn)一管雙檢或多檢。7、操作安全，縮短時間，提高效率。熒光定量PCR是通過對PCR 擴增反應中每一個循環(huán)產物熒光信號的實時檢測從而實現(xiàn)對起始模板定量及定性的分析。 熒光定量PCR分類： ☆TaqMan熒光探針 ????PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。 ? ☆SYBR?Green熒光染料 ????SYBR?Green是一種DNA結合染料，能非特異地摻入到雙鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。它的最大優(yōu)點就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應體系中。從經濟角度考慮，它也比其它的探針的價格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結合，所以一旦反應體系中出現(xiàn)非特異擴增，那它就會影響到定量結果的可靠性與重復性。要避免這種不利因素，可以通過選擇良好的引物并優(yōu)化反應條件以消除非特異性影響。 ●主要實驗步驟如下：? RT-qPCR是由三個步驟組成: 1.反轉錄:依賴反轉錄酶將RNA反轉錄成cDNDA; 2.擴增:用PCR的方法擴增cDNA; 3.檢測:實時檢測和定量擴增的產物. 具體實驗操作步驟：
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