快速過(guò)濾法質(zhì)粒大量提取試劑盒(10preps)
產(chǎn)品名稱： 快速過(guò)濾法質(zhì)粒大量提取試劑盒(10preps)
英文名稱： Plasmid ezFilter maxi kit
產(chǎn)品編號(hào)： PD1512-01
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國(guó)圣地亞哥
品牌商標(biāo)： Biomiga
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國(guó)）
- 聯(lián)系人 :
- 地址 : 上海市閔行區(qū)吳河路328號(hào)A棟2樓
- 郵編 : 201109
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 400-826-1968 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
試劑盒組分：
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Catalog# |
PD1512-01 |
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Preps |
10 |
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ezBindTM Columns |
10 |
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Filter syringe(60 mL) |
10 |
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Buffer A1 |
110 mL |
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Buffer B1 |
110 mL |
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Buffer C1 |
135 mL |
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Buffer KB |
110 mL |
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RNase A(20 mg/mL) |
11 mg(550 μL) |
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Elution Buffer |
30 mL |
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User Manual |
1 |
?
保存條件：
?RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
?
注意事項(xiàng)：
- 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：1 mg
操作簡(jiǎn)明步驟：
- 取100 μL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過(guò) 200 mL)的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入10 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
- 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入12 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將裂解液轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中，放在一個(gè)50 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來(lái)，對(duì)準(zhǔn)50 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過(guò)，有些裂解液可能會(huì)殘留在沉淀中。注：靜置10 分鐘時(shí)RNase A將工作，排除RNA污染。
- 加入12 mL 100% 乙醇，立即混勻，需馬上離心過(guò)DNA柱。
- 立即轉(zhuǎn)移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過(guò)DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中，室溫下>2,500 x g 開(kāi)蓋離心10分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的50 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，5,000 x g離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，5,000 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程：
