微生物基因組重測序
產品名稱: 微生物基因組重測序
英文名稱: Microbial genome resequencing
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產品介紹
微生物重測序能夠快速解析菌株之間的變異信息。利用高通量測序技術,對一個物種的全基因組進行測序,并與近緣參考基因組進行比對,開發海量的SNP,InDel等分子標記,系統全面的檢測菌株之間的基因變異信息。同時還可進一步進行物種進化、種群特征、選擇壓力等深入研究。
適用范圍
有參考基因組的菌株或真菌;
選擇具有代表性的個體。
技術優勢
????快速精準高效的解析基因組之間的差異,對全基因組的每一個堿基進行分析,獲得最廣泛的分子標記;
????遺傳變異類型豐富:單核苷酸多態性(SNP)、插入缺失(InDel)一網打盡,深度解析基因變異的各個方面;
快速高效:僅僅45個工作日即可完成全部分析內容,全方位加速微生物基因組快速發展;
精準分析:10年以上項目經驗的專業分析人員深入解析,精確解決科研過程中的各個問題。
技術流程
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重測序建庫及測序流程

微生物重測序分析流程
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解決問題 |
核心軟件 | |
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原始數據過濾 |
過濾低質量的序列 |
FastqQC/NGS-QC |
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參考基因組比對 |
將測序reads比對到參考基因組 |
BWA/samtools |
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多態性檢測 |
研究菌株的地域傳播規律 |
Samtools/GATK/BreakDancer |
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變異基因功能注釋 |
統計變異基因分布規律 尋找變異豐富的功能分類 |
Gene?Annotation?(In?house)/Anovar/SnpEff |
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系統進化樹構建 |
探究不同菌株的進化關系 |
Mega/RaxML/PhyML |
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選擇壓力分析 |
了解微生物進化過程 |
技術參數
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產品 |
測序平臺 |
測序策略 |
檢測內容 |
項目周期 |
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細菌重測序 |
Illumina?PE150 |
350bp?文庫?≥?100× |
SNP、InDel、SV |
45個工作日 |
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真菌重測序 |
Illumina?PE150 |
350bp?文庫?≥?30× |
SNP、InDel、SV、CNV |
45個工作日 |
案例解析
案例一:蛭弧菌個體重測序
蛭弧菌(Bdellovibrio?bacteriovorus)是一類能寄生于其它細菌,并能導致其裂解的革蘭氏陰性菌。蛭弧菌比一般的細菌個體小,能通過細菌濾器,有類似噬菌體的作用,是一類能“吃掉”細菌的細菌。文章對一株野生型和一株突變型蛭弧菌進行了全基因組重測序,該突變型蛭弧菌可以不依賴宿主繁殖與生存。與參考基因組比對后,兩株蛭弧菌分別獲得28,386和28,379個突變位點,它們之間的差異突變位點為19個,其中包括一個2bp的InDel引起了hit基因的移碼突變,該基因與蛭弧菌的宿主依賴性相關。

?????????????????????????圖1??兩株蛭弧菌的基因組圈圖
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案例二:裂殖酵母群體重測序
裂殖酵母(Schizosaccharomyces?pombe)是重要的真核模式生物,對100年來全球20個國家和地區收集的161個自然菌株的基因組進行了重測序,測序深度中值為76×。結果發現這些菌株有適中的遺傳多態性(π=3×10-3)和較弱的群體結構。同時發現裂殖酵母的起源可以追溯到約公元前340年,并且一些重要的起源時間節點和古代文明的發展密切相關。通過全基因組關聯分析揭示了基因型和表型變異之間的關系。

圖1?全基因組關聯分析結果
參考文獻
[1]Wurtzel?O,?Dori-Bachash?M,?Pietrokovski?S,?et?al.?Mutation?detection?with?next-generation?resequencing?through?a?mediator?genome[J].?PLoS?One,?2010,?5(12):?e15628.
[2]?Jeffares?D?C,?Rallis?C,?Rieux?A,?et?al.?The?genomic?and?phenotypic?diversity?of?Schizosaccharomyces?pombe[J].?Nature?Genetics,?2015,?47(3):?235-241.
常見問題
(1)上機測序前如何判斷樣本是否有其他細菌污染?
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送樣后,美吉會對細菌樣本的16S?rRNA進行擴增、測序和比對,確認是否存在其他細菌污染,如果一代測序峰圖有明顯的雙峰現象,或者NCBI的比對結果與預期結果不相符,則可以判斷樣本中存在污染。
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(2)重測序分析是否進行de?novo拼接?
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能夠比對到參考基因組上的reads序列是不進行de?novo拼接的,但美吉會對沒有比對到參考基因組上的reads進行de?novo組裝,發現基因組大片段插入和缺失。
