MTT與細胞增殖毒性分析
產品名稱: MTT與細胞增殖毒性分析
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MTT(噻唑蘭 )法
??? 原理:活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結晶物,并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。DMSO能溶解細胞中的藍紫色結晶物,用酶聯免疫檢測,以在490nm波長處測定其吸光度,可間接反映活細胞數。在一定細胞數范圍內,MTT結晶物形成的量與細胞數成正比。此法已經廣泛應用在一些生物活性因子的活性檢測、 抗腫瘤藥物的篩選、細胞毒性試驗和腫瘤放射敏感性的測定等。
??? 注意事項:用此法測細胞活力,為保證結果的準確性,最好在試驗前測定每種細胞的貼壁率,倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線,再確定每孔細胞接種數和培養時間,以保證培養終止時不會過滿。另外,實驗時注意:
1)???細胞數:根據各細胞生長時間和速度及藥物作用時間種合適的細胞數
2)???血清:測定細胞因子等對細胞生長影響時需要采用低濃度血清或無血清
3)???空白對照:設置藥物刺激的空白對照,并作為比色的空白調零
4)???藥物介質對照:派出藥物溶解介質的干擾需同時加入藥物介質對照
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圖:考慮以上注意因素并排出后,根據不同藥物濃度得出兩種藥物的抑制率曲線及方程,最后得出每種藥物作用的IC50(抑制率為50%)點的藥物濃度。
