精準基因編輯細胞株定制

隨著ZFN、TALEN和CRISPR-Cas9技術的興起，基因組編輯領域獲得長遠的發展。借助靶向基因組編輯工具，我們可以在基因組水平上精確編輯，設計產生全新的細胞株模型。定制精準編輯細胞株模型(genome edited cell line models)是體內研究基因功能的理想工具，已成為現代生物學在基因功能研究、腫瘤治療和生物制藥等領域重要的研究材料。基因組編輯技術（genome editing）是一種可以在基因組水平上對DNA序列進行改造的遺傳操作技術。這種技術的原理是構建一個人工內切酶，在預定的基因組位置切斷DNA，切斷的DNA在被細胞內的DNA修復系統修復過程中會產生突變，從而達到定點改造基因組的目的。DNA修復系統主要通過兩種途徑修復DNA雙鏈斷裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端連接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重組（homologous recombination, HR）。北京科沿有道生物科技有限公司不斷探索基因組編輯在多種細胞系中的應用，已成功在數十種細胞系中實現了高效基因組編輯。基于慢病毒包裝技術、轉座子技術及 CRISPR/Cas9 靶向基因編輯技術，推出了精準編輯細胞株定制服務，包括基因敲除、定點基因敲入、點突變和定點基因大片段刪除。

基因定點敲入/點突變細胞系

CRISPR-Cas9系統編輯切割產生DNA雙鏈斷裂（Double-Strand Breaks， DSBs），可誘發 DNA 的自然修復機制。如果在此基礎上同時為細胞引入一個同源性的外源DNA作為修復模板（Donor），該Donor序列上帶有目標突變，那么，細胞可據此通過同源重組（Homology-directed Repair， HDR）修復機制獲得目標突變，產生目的點突變細胞。若修復模板序列帶有目的基因序列，則可通過同源重組機制實現基因定點插入，最長可定點敲入10kb的目的基因。

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基因定點敲入/點突變細胞系構建流程

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基因定點敲入/點突變細胞系交付材料

1.?靶基因敲除單克隆細胞系凍存細胞2支；

2.?實驗測序數據；

3.?詳細的實驗結題報告（包括實驗步驟，引物信息，實驗結果等）。

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科沿有道基因定點敲入/點突變技術優勢：

1.?自主研發優化的CRISPR系統和donor設計，有效提高編輯成功率；

2.?最長可定點敲入10kb的目的片段；

3.?針對不同細胞系制定專屬方案，有效提高編輯成功率；

4.?服務團隊經驗豐富，確保服務質量。

細胞染色體核型分析（Karyotype Analysis）市場宣傳資料

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染色體核型分析是以分裂中期染色體為研究對象，根據染色體的長度、著絲點位置、長短臂比例、隨體的有無等特征，并借助顯帶技術對染色體進行分析、比較、排序和編號，根據染色體結構和數目的變異情況來進行診斷。核型分析可以為細胞遺傳分類、物種間親緣的關系以及染色體數目和結構變異的研究提供重要依據。

染色體是細胞分裂期高度凝集的DNA蛋白質纖維，是間期染色質結構緊密盤繞折疊的結果。

核型是指一個細胞的染色體按其大小、形態特征排列起來構成的圖像。染色體標本經顯帶技術處理，可使染色體長軸上顯示出明暗或深淺相間的帶紋，每條染色體都有獨特而恒定的帶紋。

核型分析：將待檢細胞進行染色體數目、形態結構分析，確定其核型是否與正常核型一致。

G顯帶：用胰蛋白酶處理固定于載玻片上的染色體標本，再用giemsa染液染色的顯帶技術。

服務項目

人多能干細胞核型分析服務（hiPSC核型鑒定），間充質干細胞核型鑒定（MSC染色體核型分析）；染色體G顯帶標本制備。腫瘤細胞染色體常規制備

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染色體核型分析樣本類型

●?? 人染色體：活細胞、固定細胞、外周血

●? ?小鼠染色體：固定細胞、外周血、骨髓、脾臟

送樣要求

●? 固定細胞 -? 細胞數量>10^6, 冰袋運輸

●??外周血 -? EDTA抗凝血5ml, 冰袋運輸

檢測周期

收到樣本后15-20個工作日。

提供結果

核型分析檢測報告。

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保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶提供產品的檢測信息與數據，履行保密義務，未經客戶許可，不得擅自公開發表或使用，不得泄露給第三方。檢測產品僅做數據統計用。

SSR多態性引物篩選

選取少量樣品，對多對微衛星引物進行篩選，先合成M13接頭引物序列對引物進行試驗，選出引物效率高擴增穩定且具有多態性的引物，合成熒光標記引物，設計引物組合混檢方案進行遺傳多樣性分析。

技術流程

可提供的服務

（1）基因組DNA提取、擴增、毛細管電泳檢測；

（2）按照您實驗的要求,為您設計實驗方案。包括：熒光標記的選擇，M13接頭引物、實驗條件摸索，內標的選用等等；

（3）合成熒光引物和接頭引物；

（4）根據所設計的實驗方案用引物完成PCR擴增；

（5）M13-SSR技術結合了SSR與熒光檢測優點，M13具有通用性成本相對較低；

（6）GeneMarker軟件對收集到的數據進行初步處理分析?, 片段大小的精確分析和等位基因判讀解析列到Excel表格中，為您下一步進行關聯分析或連鎖分析等遺傳分析提供數據可靠的數據。

技術優勢

（1）成熟的技術平臺：美國應用生物系統公司ABI 3130XL基因分析儀、GeneMarker分析軟件;

（2）多重檢測：如果您研究的位點較多，為了節約您的成本,我們一個泳道可以同時檢測3-5種不同的熒光；

（3）周期短：散樣一般是從收到訂單時起，檢測上機只需24-48小時即可收到結果，默認僅提供審核復檢；

送樣要求

（1）基因組DNA：濃度20-30ng/ul以上，OD260/280在1.7-2.1左右，電泳有基因組主帶，需冰袋運輸，需要本公司提取基因組，需要闡明特殊樣品類型，如多糖多酚樣品

（2）可處理的樣本類型