CRISPR KI(Point Mutation)
產品名稱： CRISPR KI(Point Mutation)
英文名稱： CRISPR KI(Point Mutation)
產品編號： IC5
產品價格： 詢價
產品產地： null
品牌商標： null
更新時間： 2025-08-15T13:51:13
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啟東芳景生物科技有限公司
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CRISPR KI(Point Mutation)
在CRISPR和donor(同源臂arm+點突變序列PM)的共同作用下，實現對目標靶點進行切割的同時，通過HR(同源重組)修復，將基因組DNA序列精確替換，造成目的氨基酸點突變。
技術優勢：
?優化了donor質粒序列的設計，在目標氨基酸兩側引入若干同義突變，提高了基因編輯和分子鑒定的效率，且不會對基因的表達和功能產生額外影響。
?針對其他物種基因點突變表型研究，可通過制作黑腹果蠅同源基因的同位點突變模型來進行功能驗證。芳景生物免費提供黑腹果蠅同源基因及對應位點分析服務。客戶只需提供物種、基因、目標氨基酸位點等信息，我們即可全流程制作并獲得目標點突變果蠅模型品系。
| CRISPR KI(point mutation) | ||
| 實驗步驟 | 內容 | 周期(周) |
| target測序 | 1.方法：PCR測序 2.目的：確定注射果蠅品系的靶序列，確保gRNA序列正確并進行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制備 | 1.gRNA設計：一個靶位點設計兩個gRNA 2.gRNA合成：T7體外轉錄合成 3.cas9-mRNA合成：優化的cas9-DNA質粒為模板，體外轉錄合成cas9-mRNA |
0 |
| donor質粒載體構建 | 1.arm載體構建：無縫克隆連接 載體：Amp抗性常規載體 片段：注射果蠅基因組DNA中克隆5'+3'同源臂 2.Donor載體構建：無縫克隆連接 載體：arm載體PCR線性化，并引入目的點突變和gRNA識別位置點突變 3.Donor質粒去內毒素提取 |
3~4 |
| 顯微注射 | 1.注射品系：w1118(或客戶指定品系) 2.注射樣品：gRNA+cas9-mRNA+donor 3.注射胚胎數量：400-500個 |
2 |
| 雜交鑒定和構建穩定品系 | 1.P0果蠅與平衡子雜交，并進行點突變和基因組插入位置PCR鑒定 2.陽性P0的子代F1果蠅與平衡子雜交，并進行點突變和基因組插入位置PCR和測序鑒定 3.陽性F1的子代F2果蠅與平衡子雜交，并進行點突變和基因組插入位置PCR鑒定 4.陽性F2的子代F3果蠅自交構建穩定品系 5.F3的子代F4果蠅自交構建純合品系，并進行點突變測序鑒定 |
8~10 |
| 合計 | 13~16 |