?
SDS-PAGE及Western?blot
?
索引
?
蛋白電泳（SDS-PAGE）……………………
電泳試劑總表……………………………………………………
制膠………………………………
上樣及電泳……………………
染色
蛋白提取
蛋白定量
Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用說明
BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明
Lowry蛋白濃度測定試劑盒使用說明
蛋白分子量標準（圖）
考馬斯蛋白膠快速染色液
Western?blot
Western?blotting?DAB檢測試劑盒
Western?blotting?ECL化學發光檢測試劑盒
Western?blotting?試劑盒使用說明
??
?
蛋白電泳
蛋白質的電泳分離是重要的生物化學分離純化技術之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現象.根據所采用的支持物不同,有瓊脂糖凝膠電泳,淀粉凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳等。其中,聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)由于無電滲作用,樣品用量少(1-100μg)，分辨率高，凝膠機械強度大,重復性好以及可以通過調節單體濃度或單體與交聯劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優點而受到廣泛的應用。
PAGE原理
聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺?(簡稱Acr)?和交聯劑N，N’—亞甲基雙丙烯酰胺（簡稱Bis）在催化劑作用下，聚合交聯而成的具有網狀立體結構的凝膠，并以此為支持物進行電泳。?聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）可根據不同蛋白質分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產生的不同遷移率將蛋白質分離成若干條區帶。
SDS-PAGE原理
SDS是一種陰離子表面活性劑，能打斷蛋白質的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質分子結合成復合物，使蛋白質帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質-SDS?復合物在電泳時的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長的函數。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡稱SDS—PAGE）。實驗使用過程中，還加入DTT或者***，以打開蛋白間的二硫鍵，破壞蛋白質的四級結構。SDS—PAGE最常采用垂直板不連續系統（分離膠與濃縮膠）。
?
蛋白電泳試劑（部分試劑可以相互替換）
|
系號 |
貨號 |
名稱 |
|
1 |
T8060 |
TRIS??三羥甲基氨基甲烷 |
|
2 |
G8200 |
Glycine???甘氨酸 |
|
3 |
S8010 |
SDS???十二烷基硫酸鈉 |
|
4 |
A8080 |
Acrylamide????丙烯酰胺 |
|
5 |
M8200 |
N,N-Methylene?Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺 |
|
6 |
A8090 |
Ammonium?Persulfate???過硫酸胺 |
|
7 |
D8220 |
DTT???二硫蘇糖醇 |
|
8 |
M8210 |
β-Mercaptoethanol??β-*** |
|
9 |
T8090 |
TEMED???四甲基*** |
|
10 |
A1010 |
30%丙烯酰胺（29:1） |
|
11 |
S1051 |
4XSDS-PAGE分離膠緩沖液（PH=8.8） |
|
12 |
S1052 |
4XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液（PH=6.8） |
|
13 |
P1016 |
4×蛋白上樣緩沖液(含β-***) |
|
14 |
P1015 |
4×蛋白上樣緩沖液(含DTT) |
|
15 |
D1070 |
1M?DTT |
|
16 |
A1030 |
10%過硫酸氨 |
|
17 |
T1020 |
1M?Tris-HCL?(PH6.8) |
|
18 |
T1010 |
1.5M?Tris-HCL(PH8.8) |
|
19 |
S1010 |
10%SDS |
|
20 |
T1070 |
5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液 |
? ? SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，實驗室可根據自己的情況和習慣來選擇試劑。如選擇1、2、3、4、5、6、7、8、9全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。如10、11、12、13/14、16、9、20。還可選擇10、13/14、16、9、17、18、19、20。
?
一，制膠
?
凝膠配制表（一）