近年來(lái)，隨著RNA研究的不斷深入，線性RNA分子在生物學(xué)研究和治療開發(fā)領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用潛力，例如mRNA疫苗。然而，長(zhǎng)鏈線性RNA較短的半衰期限制了其有效性。環(huán)狀RNA (circRNA)是一類單鏈閉合的環(huán)狀RNA分子，與線性mRNA相比，circRNA具有穩(wěn)定性高、免疫原性低、表達(dá)持久等優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為下一代RNA療法賽道的新秀。circRNA體外環(huán)化技術(shù)是研究的關(guān)鍵，目前，RNA的體外環(huán)化主要通過(guò)化學(xué)合成和酶促連接（分為T4連接酶法和核酶法）兩種方法實(shí)現(xiàn)。
在眾多技術(shù)路線中，基于T4連接酶法的技術(shù)路線備受關(guān)注。該技術(shù)路線主要涉及到T4 DNA Ligase 1、T4 RNA Ligase 1以及T4 RNA Ligase 2這幾種關(guān)鍵酶。值得注意的是，不同的T4連接酶在功能方面存在著顯著的差異，這種差異決定了它們各自適用于不同結(jié)構(gòu)的RNA連接任務(wù)。其中，T4 RNA Ligase 2在對(duì)雙鏈RNA缺口進(jìn)行連接時(shí)，展現(xiàn)出了極高的連接效率。
圖1. T4連接酶作用原理比較[1]
T4 RNA Ligase 2，是一種依賴于ATP的雙鏈RNA連接酶（double-strand RNA ligase, dsRNA Ligase），具有RNA鏈分子間和分子內(nèi)連接活性，可連接雙鏈RNA中的切刻，也可用于連接雙鏈結(jié)構(gòu)中RNA 3´羥基與DNA 5´磷酸基的切刻。與T4 RNA Ligase 1相比，該酶對(duì)雙鏈RNA切刻的連接活性要明顯高于對(duì)單鏈RNA的末端連接。
T4 RNA Ligase 2能夠通過(guò)三步反應(yīng)將相鄰的3´羥基與5´磷酸多核苷酸連接起來(lái)，其機(jī)理如下：
①連接酶與ATP反應(yīng)形成酶-AMP復(fù)合中間體；
② AMP脫離酶-AMP復(fù)合體，與RNA的5’-磷酸結(jié)合，形成5’端腺苷化的RNA；
③ 5’端腺苷化的RNA與3’-OH連接形成磷酸二酯鍵，釋放AMP。
圖2.T4連接酶結(jié)構(gòu)與作用機(jī)理[2][3]
基于T4 RNA Ligase 2在RNA連接中的卓越性能，翌圣生物隆重推出T4 RNA Ligase 2 (Cat#14652)，為您的分子生物學(xué)研究提供更高效、更穩(wěn)定的工具。
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià) |
活動(dòng)價(jià) |
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T4 RNA Ligase 2 |
14652ES80 |
1000 U |
535元 |
0元 |
活動(dòng)細(xì)則：
1、活動(dòng)時(shí)間：2025年2月12日-2025年2月28日；
2、活動(dòng)名額有限，每位客戶限一套。
翌圣T4 RNA Ligase 2(Cat#14652) 性能展示
01
連接活性強(qiáng)
將Yeasen和進(jìn)口Supplier N*的T4 RNA Ligase 2按照不同投入量加入體系中對(duì)dsRNA底物進(jìn)行連接，結(jié)果顯示其能有效連接dsRNA底物，連接效果與進(jìn)口Supplier N*相當(dāng)。
圖3. T4 RNA Ligase 2連接效果驗(yàn)證注：20 μL反應(yīng)體系中包含終濃度為20 μM的dsRNA連接底物
02
無(wú)核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留
將100 U T4 RNA Ligase 2分別與核酸底物一起孵育，瓊脂糖凝膠電泳比較譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣3個(gè)批次的T4 RNA Ligase 2均無(wú)核酸外切酶、切口酶、RNase殘留。
圖4. T4 RNA Ligase 2核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果
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參考文獻(xiàn):
[1]Obi P, Chen Y G. The design and synthesis of circular RNAs[J]. Methods, 2021, 196: 85-103.[2]Easey A. Synthetic Biology Methods to Optimise T4 RNA Ligase Activities[D]. University of East Anglia, 2018.[3] Viollet S, Fuchs R T, Munafo D B, et al. T4 RNA ligase 2 truncated active site mutants: improved tools for RNA analysis[J]. BMC biotechnology, 2011, 11: 1-14.